Construcción de un clon infeccioso de ToBRFV: amplificación del genoma y de la ribozima

Abstract

"El virus del fruto rugoso marrón del tomate (ToBRFV) es un virus emergente que afecta gravemente los cultivos de tomate y pimiento, ocasionando pérdidas económicas a nivel mundial. Debido a su rápida propagación y persistencia, es necesario desarrollar herramientas moleculares para estudiar su biología y patogenicidad. Los clones infecciosos son una estrategia fundamental en virología, ya que permiten analizar el comportamiento del virus en condiciones controladas. En esta tesis se tuvo como objetivo amplificar el genoma completo de ToBRFV y obtener la secuencia de la ribozima del virus de la hepatitis delta (HDV) con el terminador de la sintasa de nopalina (NosT), con el fin de construir un clon infeccioso en un futuro. El genoma de cuatro aislados virales, obtenidos en diferentes regiones de México, fue amplificado mediante RT-PCR, logrando obtener un amplicón completo de 6.4 kb para cada uno. Adicionalmente, el fragmento ribozima-NosT fue construido mediante PCR de solapamiento. Tres de los cuatros aislados estudiados, fueron inoculados en Nicotiana benthamiana y en plantas de tomate comercial por el fin de determinar su grado de virulencia. Los resultados mostraron que el aislado ToBRFV procedente de Jalisco presentó la mayor virulencia, seguido de ToBRFV procedente de mercado local con efectos moderados, mientras que ToBRFV procedente de Hidalgo no mostró síntomas. La detección del virus se confirmó mediante RT-PCR. Estos resultados demuestran que existe una variabilidad de virulencia en la población de ToBRFV en México, y proporcionan elementos para el desarrollo de un clon infeccioso, que permitirá estudiar el ToBRFV y contribuir al diseño de estrategias para su control"